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G-CSF浓度与OD值成正比，大鼠500、粒细落刺

3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应G-CSF含量。胞集柠檬酸盐、激因肝素抗凝）、大鼠在第一管中加入8000pg/ml的粒细落刺标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul，

试剂盒组成（2-8℃保存）

酶标板（Coated Wells）	96孔	酶标抗体工作液（Enzyme Conjugate）	12ml
10×标本稀释液（Sample Buffer）	12ml	20×浓缩洗涤液（Wash Buffer）	50ml
标准品（Standards）：4ng/瓶	2瓶	底物工作液（TMB Solution）	12ml
第一抗体工作液（Biotinylated Antibody）	12ml	终止液（Stop Solution）	12ml

准备试剂与收集血样

1.收集标本：血清、胞集

4.本试剂盒宜置4oC冰箱保存。激因

2.特异性：可同时检测重组或天然的大鼠大鼠G-CSF。

9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。粒细落刺

5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。胞集每管加入标本稀释液300ul。激因向滤纸上印干。大鼠保持板条干燥。粒细落刺OD值为纵坐标，胞集

6. 洗板：同前。

2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，

注意事项

1.以上标准孔及待测样品均建议做复孔，

大鼠粒细胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA试剂盒使用说明书

2011-07-21 12:04 · Truda

本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。

5.本试剂盒仅用于科研，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，

8. 每孔加入100ul终止液混匀。

来源：上海西唐生物科技有限公司

联系电话：021-65333639 55229872 55229873

E-mail：westang@163.com

在坐标纸上作图，血浆（EDTA、

3.重复性：板内、

 (用于血清、细胞培养上清液和其它生物体液内)

原理

本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。组织匀浆等尽早检测，用抗大鼠 G-CSF 单抗包被于酶标板上，

2.洗涤过程很关键。设标准管8管，避免反复冻融。2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20 ℃或-70 ℃）保存，

3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。

2.标准品液配制：使用前加入0.5ml蒸馏水混匀，将反应板置37℃30分钟。

3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。标准品和样品中的 G-CSF与单抗结合，在450nm处测OD值，形成免疫复合物连接在板上，

3.板条开封后剩余板条要再封好，画出标准曲线。

试剂盒性能

1.灵敏度：最小的G-CSF 检测浓度小于30pg/ml。每次测定应同时做标准曲线。加入底物工作液显蓝色，置37 ℃暗处反应15分钟。62.5、1000、细胞培养上清液、洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。从第七管中吸出300ul弃去。125、

7. 每孔加入底物工作液100ul，不能用于临床诊断！

4.洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）

检测程序

1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，最后加终止液硫酸，0 pg/ml为横坐标，板见变异系数均小于10％。如此反复作对倍稀释，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。血浆、不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。250、移至第二管。可通过绘制标准曲线求出标本中G-CSF浓度。

4. 洗板：同前。2000、

结果计算与判断

1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。

2. 以标准品4000、配成8000pg/ml的溶液。第八管为空白对照。加入生物素化的抗大鼠G-CSF，